El género Macrobrachium , también conocido por el nombre común de langostino, camarón del río, camarón de agua dulce, entre otros, según la región, se distribuye en zonas tropicales, desde la Península de Baja California hasta el noroeste de Perú. Macrobrachium, e s una de las especies nativas con alto potencial de cultivo, y de las más grandes y robustas, con un peso de hasta 500g. Es por ello, que se encuentra sobreexplotada, sin regulación, ni conocimiento de sus poblaciones naturales, por lo que existe la necesidad de poner énfasis en aspectos reproductivos. Martín, et al. , (2021) realizaron el ensamble del transcriptoma y análisis diferencial entre testículos, conductos deferentes y ámpula terminal de M. americanum , y se obtuvo que cerca de 70 genes se relacionaron con determinación de sexo, espermatogénesis, embriogénesis , entre otros procesos reproductivos. Con ello, surge la necesidad de verificar y evaluar la expresión de genes de interés relacionados con la reproducción del M. americanum , por medio de las técnicas PCR y qPCR.
La validación de la expresión de los genes (f actor de elongación 1α, gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa, β-actina, hormona de la glándula androgénica parecida a la insulina y sperm
gelatinasa ) comenzó con el diseño de primers de dichos genes, utilizando plataformas como BLAST-NCBI, Primer3, Primer-BLAST y Oligo
analyzer, evaluando así los parámetros como contenido de GC, longitud y temperaturas de fusión. Una vez diseñados los primers , se procedió a extraer ARN de muestras de vasos deferentes, testículos y ámpula terminal, utilizando como reactivo TriReagent , y evaluando la integridad del ARN por medio de un gel de agarosa 1%. Posteriormente, se trataron las muestras con DNAsas y se evaluó la contaminación por medio de PCR punto final, utilizando como gen de referencia β-actina. Una vez que se corroboró que no se tenía presencia de contaminantes ni ADN y evaluar la integridad del ARN por medio de gel de agarosa 1%, se procedió a realizar homogenizados con base en el transcriptoma realizado por Martín,
et al. , (2021) y se realizó la cuantificación de ácido nucleico presente en cada una. Seguidamente, se sintetizó cDNA de las muestras a condiciones específicas, y se cuantificó nuevamente el cDNA en NanoDrop , los resultados obtenidos mostraron que las muestras E, F, G y H presentaron mayor concentración. Finalmente, para estandarizar los genes previamente mencionados, se realizaron gradientes de temperatura con base en las temperaturas de fusión de los primers diseñados, utilizando solo las muestras que resultaron con más concentración de cDNA. Una vez determinada la temperatura ideal, se procedió a realizar PCR punto final para el resto de las muestras.
Finalmente, los genes de interés relacionados con la reproducción del langostino del río,
se expresan en los diferentes tejidos del tracto reproductor masculino, amplificando para factor de elongación 1α a una temperatura de 62°C , gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa 58°C, β-actina 59°C, hormona de la glándula androgénica parecida a la insulina 64°C, y sperm
gelatinasa 63°C. Así pues, se recomienda concluir con la evaluación de la expresión por medio de qPCR y compararla entre los diferentes tejidos.