ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA Y ANTI-QUORUM SENSING DEL EXTRACTO CRUDO DE LA BACTERIA MARINA Pseudoalteromonas piscicida 36Y_RITHPW CONTRA VIBRIO PATOGENICO EN CAMARON
Las bacterias del género Pseudoalteromonas se encuentran presentes en el ambiente marino, sedimento y organismos acuáticos. Este grupo de gamma-proteobacterias involucra la síntesis de bioactivos y enzimas hidrolíticas con propiedades antibacterianas, antivirales, antifouling, entre otros. Recientemente, se han considerado como un potencial probiótico para cultivos de camarón. El objetivo del estudio fue evaluar la actividad antimicrobiana y quorum quenching de un extracto crudo a base de acetato de etilo de la bacteria P. piscicida 36Y_RITHPW contra una cepa patógena de Vibrio, y determinar la presencia del gen biosintético PKS.
La cepa 36Y_RITHPW fue aislada de agua marina hipersalina (110%) colectada en El Riíto, Sonora, México. La bacteria presentó colonias con pigmentación naranja, una morfología de bacilos cortos Gram negativos, actividad de proteasas, amilasas y ausencia de quitinasas. A partir del sobrenadante de un cultivo en 500 ml en Zobell MB (HiMedia) durante 48 h a 30oC y 130 RPM, se obtuvo un extracto crudo con acetato de etilo (1:1); el cual fue concentrado mediante un rotavapor (Caframo) y resuspendido en metanol para las pruebas, el mismo solvente se utilizó como control. Para la concentración mínima inhibitoria (MIC) y bactericida mínima (MBC) se aplicó el extracto crudo (1,000 µg/ml), con diluciones seriadas en cada pozo de una microplaca por triplicado, y una suspensión bacteriana de Vibrio parahaemolyticus (AHPND) (2x105 UFC/ml) con cloruro de tetrazolio (0.5 mM). Para el ensayo anti-quorum sensing, la cepa reportera Chromobacterium violaceum (CV2656) se extendió en placas de agar Luria Bertani (HiMedia) y dentro de un pozo se agregó el extracto, incubándose por 24 h a 37oC (Fig. 1). Mediante PCR se determinó la presencia del gen PKS (policétido sintetasa) en el ADN genómico de la bacteria 36Y_RITHPW, utilizando los primers degKS2 en una reacción de 50 µl (Fig. 2).
El extracto presentó un valor de 50 µg/ml en MIC y 100 µg/ml en MBC. El índice de MIC (MBC/MIC<4) demostró actividad bactericida contra V. parahaemolyticus (AHPND). La bacteria P. piscicida 36Y_RITHPW presenta genes biosintéticos relacionados con la producción de biomoléculas antimicrobianas, así mismo mediante pruebas in vivo complementarias se perfila como una alternativa de biocontrol en cultivos de camarón.
