ESTANDARIZACIÓN DEL PROTOCOLO DE PCR PARA EL ANÁLISIS DE POBLACIONES SILVESTRES DE PARGO MANCHA Lutjanus guttatus Y PARGO ROJO Lutjanus peru MEDIANTE EL USO DE MICROSATELITES EN EL GOLFO DE NICOYA

El desarrollo de las técnicas moleculares ha permitido realizar estudios genéticos en poblaciones de interés comercial, utilizando marcad ores genéticos que incluyen  los micro-satélites . Estos corresponden a secuencias cortas dentro del ADN que se repiten constantemente y que se caracterizan por un alto grado de polimorfismo y distribución en el genoma de los organismos. Pese a su importancia comercial en Costa Rica, existen grandes vacíos de información sobre la variación y estructura genética de las poblaciones silvestres del pargo rojo (Lutjanus peru ) y el pargo mancha (Lutjanus guttatus) . Con el fin de apl icar estas técnicas  moleculares se estandarizaron los protocolos de PCR para 8 pares de micro-satélites.

Se capturaron 60 individuos en el Golfo de Nicoya .  Al momento de la captura, se tomó una muestra de tejido  de  2x2 cm de  la aleta dorsal, la cual se conservó en alcohol al 95%. En el laboratorio, se procedió a la extracción del ADN utilizando un kit comer cial. Posteriormente,  se utilizó un biofotómetro  para medir la cantidad y calidad del ADN extraído. Para la estandarización del p rotocolo de PCR, se preparó una mezcla de 25µL de producto final, incluyendo máster mix , agua ultrapura , el forward y el reverse de cada microsatélite y ADN diluido 1/10.  Las condiciones de PCR fueron las mismas, variando únicamente la temperatura de acoplamiento (Cuadros 1 y 2).

Los productos del PCR se corrieron en gel de agarosa al 2%, lo que validó la estandarización de los protocolos de PCR para cada micro-satélite (Fig.1).