IDENTIFICACIÓN DE FACTORES DE VIRULENCIA DE Lactococcus garvieae AISLADO DE Oreochromis niloticus A TRAVÉS DE ESPECTROMETRÍA DE MASAS MALDI TOF/TOF
Lactococcus garvieae es un microorganismo Gram-positivo causante de episodios de lactococosis, una condición de septicemia hemorrágica en diferentes especies de peces entre ellos Oreochromis niloticus, Tilapia. Este microorganismo ha sido identificado como responsable de grandes pérdidas en la actividad acuícola. Esta bacteria ha pasado a ser considera un agente patológico emergente, por los multiples episodios reportados a nivel mundial.
A través de espectrometría de masas- MALDI TOF/TOF, técnica que permite realizar la identificación de proteínas presentes en muestras complejas sin purificar, es posible tener una visión clara sobre los componentes del proteoma celular y extracelular de microorganismos aislados.
El objetivo de esta investigación fue identificar proteínas relacionadas a la capacidad de virulencia de una cepa de Lactococcus garvieae aislada de Oreochromis niloticus Tilapia, haciendo uso de espectrometría de masas MALDI TOF-TOF del p roteoma celular y extracelular de esta cepa bacteriana.
La cepa aislada fue subcultivada en caldo Tripticasa de soja (TSB), durante 24 horas, a 30 °C con agitación a 120 rpm. Posteriormente esta cepa fue cosechada y separada del medio cultivo. Haciendo uso de la electroforesis en gel de poliacrilamida con SDS (SDS-PAGE) , se realizó la separación de la mezcla de proteínas recuperadas del componente celular y extracelular. Posteriormente las proteínas reveladas en forma de bandas fueron cortadas y procesadas a través de una digestión enzimática con tripsina, siguiendo el protocolo de Shevchenko et al. 2007.
A través del MALDI TOF-TOF se logró identificar proteínas consideradas como factores de virulencia, tales como Factor de elongación Tu, E nolase, proteína chaperona DnaK y hemolisina. Estos resultados permiten conocer las moléculas involucradas en el proceso de infección y contribuir en la búsqueda de moléculas target y desarrollo de vacunas eficientes contra este microorganismo patógeno .
